新年明けましておめでとうございます。うちの大腸菌くんからのメッセージをごらんになってください
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組換えタンパクの発現
はじめに 遺伝子工学的実験法の 目次のページ に書いたことをもう 1 度見てください。 以下はその抜粋です： ～生物の体は細胞でできており、”生命活動”の基本は”細胞の機能”であると言えます。 細胞の活動を支える主役は分子機械であるタンパク質です。そして、タンパク質の 設計図が遺伝子です。私たちは、生命活動のメカニズムを知るために、タンパク質の 機能を知る必要があります。そこで、ある特定の機能を探るためには、その機能を担う タンパク質を直接精製するか、あるいはその設計図を手に入れる必要があります。～ さて、 これまでの実験で、皆さんはカリガネエガイのヘモグロビンの設計図（cDNA）を単離し、 これをプラスミドに組み込んだわけです。これから、その設計図を利用してヘモグロビン タンパクを作ってみましょう。ここでは、（転写も翻訳も全て）大腸菌の力を借りて タンパクを合成し、できたタンパクを電気泳
PCRを始めませんか ― 長崎大学医学部附属動物実験施設 大沢一貴
LAC参考文献 PCRを始めませんか 長崎大学医学部附属動物実験施設 大沢一貴 図表は省略しました。図表を含む全文は"日本実験動物技術者協会九州支部会報、No.20、7-15, 1996 に掲載されたものです。 《はじめに》 PCR (polymerase chain reaction) という名が世に出てから10年以上が経過した。その間の技術進歩はめざましく、DNA増幅装置(サーマルサイクラーはシータス社の商品名)の開発、高度好温菌 (Thermus aquaticus: Taqの由来) ポリメラーゼの利用などを経て、今日では分子生物学の分野において、最も頻繁に利用される主要技法となっている。この業績を讃え、開発者 Kary B. Mullis には1993年に日本国際賞、翌年にはノーベル医学生理学賞が授与されている。数ある技法の中でPCRほど多くの分野で広く活用されているものは少なく
BioTechnicalフォーラム
書き込みがかなり増えてしまいサーバーの負荷が大きくなったので、新しいBioTechnicalフォーラムに移行してください。 新しいトピックは新フォーラムでのみ立ち上げ可能です。レスは付けられますが、レスも7月いっぱいで付けられなくなる予定です
【GEヘルスケア】 タンパク質溶液の濃縮
実験で十分な結果を得るためには、その実験系に適切なタンパク質濃度を知っておくことが重要です。濃度が濃い場合には同じ溶液で希釈すればよいですが、その時点でのサンプルにおけるタンパク質濃度が薄い場合には、何らかの方法で濃縮を行います。ここでは、タンパク質溶液の濃縮法についてご紹介します。 ※硫安分画や免疫沈降などの分画（フラクショネーション）操作も、目的タンパク質の濃縮につながります。 分画・フラクショネーションについての詳細 このページの目次
BioTechnicalフォーラム
バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。 新しいテーマで話を始める場合や新しい質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。 このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。
試薬について
緩衝液に使うTrisは正式名称が”Tris(hydroxymethyl)aminomethane"で分子式が(HOCH2)3CNH2です。正式名称が長いのでTrisやTris-base（水に溶かすとアルカリ性のため）、Tris-aminomethaneなどの略称でよんでいます。Tris-HClはTrisを塩酸でpH調製し、塩酸塩の状態にしたものです。 Bis-TrisもTrisと同様に"2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol"の省略です。Trisとは構造が異なりますし性質も異なります。
グリセロールストックについて?
細菌類ならなんでもできると思います。 細菌を培養した液を保存用の小さいチューブに移し、グリセロールを加えて冷凍し（液体窒素やドライアイスなどで急速冷凍するのが望ましい）、マイナス80℃のフリーザーで保存します。半永久的に保存できます。グリセロール濃度はものの本や各メーカーから提供される形によって15-50%と幅がありますが、濃度が低めのほうが再融解しにくく持ちが良いように感じます。 使用するときは、凍結したまま少量を削り取って培地にまきます。 ちなみに、生物学研究で用いられるモデル生物のひとつ、線虫もグリセロールストックします。
大腸菌株のグリセロールストックの方法 - OKWAVE
滅菌した培養液と、滅菌した60%(とか80%)グリセロールを混合した溶液を滅菌したストックチューブ等の中に作って、 そいつにプレートからかきとった菌体あるいは集菌した菌体を大量に懸濁すると思います。 そのときグリセロールの終濃度を10～20%くらいでストックにすると思います(60%グリセロールをLB培地などで薄める)。 これでだめか担当教官に聞いてみてください。 だめだったらごめんなさい。 教官に聞きたくなかったら、いったんこの方法でストックしてみて、そのストックから菌が起きれば問題ないでしょう。
☆こたろう☆
OD ODとは、Opitical Densitiy(光学密度)の略で、一般的には吸光度と呼ばれる。一般的に、分光光度計は吸光度0.100〜1.000の範囲でもっとも精度良く測定することができます。吸光度は英語で"absorbance"であるので、"A"や"Abs"と略記される。例えばA260とは、"(対象の溶液の)波長260nmにおける吸光度"を意味する。 ランベルト・ベールの法則 Lambert-Beer law 吸光度は『濃度ｃが一定なら、透過光の強さ Iは、透過する層の厚さLが厚くなると、指数関数的に少なくなる(ランベルトの法則)。また、透過する層の厚さLが一定なら、濃度ｃが濃くなると透過光の強さIは指数関数的に減少する(ベールの法則)。』というランベルト・ベールの法則で規定される。 入射光の強さを I0、透過光の強さを I、吸光度を A、光が通過する層の厚さを L、光の吸収をする物
微生物実験プロトコール集
微生物実験プロトコ－ル集 (仮設) 質問、問い合わせ、苦情はこちらへ 最終更新2010.7.6 INDEX 培地組成 基本的な試薬 Plasmid・DNAの抽出 酵母のRNAの抽出 形質転換 5-FOAによるURA3遺伝子の脱落 電気泳動（アガロースゲル電気泳動・SDS-PAGE・SDS-PAGEゲル作成早見表・Urea SDS-PAGE） 発現系 Western Blotting Northern Blotting β-galactosidase assay 顕微鏡観察 （液胞観察・間接免疫蛍光法） Two-hybrid 四分子解析 Gel-shift (EMSA) その他 研究室において超頻繁に使用されるテクのマニュアル （Mini-Prep・Ligation・Western Blotting・酵母の形質転換・酵母からのゲノムDNA抽出） 培地組成 培地計算機 Escherichia
ゲルからDNAを回収
現在ではいろんな方法でDNAをアガロースゲルから回収できますが、ここで一度基本に返ってみましょう。例えば数十bpの断片を回収しようとしたらいつもの方法で取れますか？ フェノールを使用した抽出法 用意するもの：水あるいはTris-Cl飽和フェノール 68℃の恒温槽 ゲルはローメルティング（低融点）アガロース 切り出したゲルの濃度と体積を調べる。 TEを加えて最終濃度0.3%未満にする。 例えば、1%のゲルが 500 ul あったとすると、 TE を1.5 ml 加える（最終濃度 0.25%）。15 ml コニカルチューブでやる。 68℃の恒温槽で10分間暖める。 その時、等量のフェノールを同じように68℃で暖めておく。 溶けたゲル溶液は良く混ぜて軽く遠心後、再び５分間暖める。 恒温槽からゲル溶液、温フェノールともに取り出す。 ただちにゲル溶液に等量の温
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