昔のDNAシーケンス法の思い出

Ｊｕｎ Ｙａｓｕｄａ @jyasuda1 久しぶりにツイートする。今日は爺臭く昔話など。私が研究の世界に入って今度の4月で満22年になる。最初にやっていたのがDNAシークエンスの実験だった。 Ｊｕｎ Ｙａｓｕｄａ @jyasuda1 （昔のシークエンス）当時はラジオアイソトープ標識によるサンガー法が主流で、いまだPCRも使用されていなかった。標識各種は32Pと35Sがあったがプロに愛好されていたのは35Sのほうである。その理由は35Sのほうがきれいに読めるからだ。 Ｊｕｎ Ｙａｓｕｄａ @jyasuda1 （昔のSeq2）今にして思えば32Pはエネルギーが強すぎてバンドが太くなったりとか、コントラストがつきすぎて薄いバンドを読むにはプライマーの近傍が読めないとかあったので、35Sのほうが良かったのだろう。昨日まで気管挿管とか心臓マッサージしかしてなかった私にはそんなことは想像外。

[usausa1975]

「ゲル板を割って超怒られた」どころの騒ぎではなかった。

[akirahs]

出身ラボにもプライマー合成機あったけど、高コストなのでシーケンスには使わ（え）なかった。Exonuclease IIIとMung bean nucleaseでdeletion シリーズ作って読んでた。

[symphonicworks]

昔のDNAシーケンス法の思い出 - Togetter

[mobanama]

うわー。なつかすぃー。"中身を抜いて再結合して、プラスミドのベクターの配列を利用してシーケンス反応をするのだ"市井のラボは大概そーしてたんだよ。金持ちめw

[tetrahymena]

RNAならば、学生時代にラジオアイソトープでラベリングして酵素分解し、その配列を解読したことがあるなぁ・・・

[keloinwell]

すごい話だ。/前ボスがマクサム・ギルバート法をやったことあるって言ってた。/学生実習でゲル使ってダイプライマー法で配列決めたのが最も昔の話。大学院からはキャピラリーのある標準的なシーケンサーがあった。

[aggren0x]

さすがにPCR freeが次世代シーケンサーの主流になるにはまだまだ時間かかりそうな気もしますけど

[e-domon]

私はプライマーウォーキングするほどのお金がなかったので、DNase Iでデリーションクローンのシリーズをこしらえてシーケンスしてましたよ。

[eurisko1]

私もガラス板をアルコールでくりくり拭いてゲルを作ったけど、それ以前の世界。コームがうまく抜けないと世をはかなんだ。終わるまで一晩かかってポリマー足すためにシーケンサーの前に布団敷いて寝た。