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ドロップレットデジタルPCRを使用したゲノムへの変異導入数の超高感度定量
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ドロップレットデジタルPCRを使用したゲノムへの変異導入数の超高感度定量
TALENsおよびCRISPR/ Cas9システムはゲノム編集技術に革命をもたらしてきました。これらは非常に有用な... TALENsおよびCRISPR/ Cas9システムはゲノム編集技術に革命をもたらしてきました。これらは非常に有用なツールですが変異導入率は場合によっては5%未満と低い場合があります。変異導入の確認は重要な作業ですが、シークエンスなどの従来法では手間がかかったりコストが高くなったりといった問題がありました。 これらの問題はドロップレットデジタルPCR(ddPCR)を使用することで改善されます。 ddPCRなら簡単にゲノムに導入された変異数の絶対定量を行うことができます。 今回ご紹介するテクニカルノートでは、変異が導入された遺伝子とWild Typeを任意の比率で混合し、ddPCRを用いて混合率を検出しています。これは0.05%の混合率でも検出が可能でした。 また実際にCRISPER/Cas9 を使ってゲノム編集(一塩基置換, 遺伝子挿入, 部分欠損 )したHEK293T細胞について変異に応じ