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はじめに 近年、遺伝子操作の技術によって細胞に遺伝子を導入し、新たな形質を宿主細胞に付与することが頻繁に行われている。宿主細胞が植物細胞の場合の遺伝子導入法には、アグロバクテリウムを用いた間接導入法をはじめ、パーティクルガン法、エレクトロポレーション法、マイクロマニュピュレーション法などの直接導入法等がある。いずれの場合にも導入した遺伝子は、主にプラスミドに組み込まれた形で導入するが、重要なのは、いかにして遺伝子が導入された細胞(形質転換体)を選抜するかということである。 形質転換体の選抜方法として最も簡単なものは、薬剤耐性による選抜である。用いられる薬剤としてカナマイシン、アンピシリン、テトラサイクリン、ハイグロマイシンなどの抗生物質や、除草剤であるビアラフォスなどがあるが、宿主細胞の種類によって使い分けられている。 薬剤耐性以外の選抜方法としては、GUS遺伝子やルシフェラーゼ遺伝子をな
RNA単離 ホットフェノール法 Amersham-Pharmacia Kit Qiagen Kit Invitrogen Kit (First Trak) ライブラリー作成 cDNA Library ゲノミックLibrary mass in vivo excision (cDNA) 形質転換 Agrobacteriumによる形質転換(Brassica) Agrobacteriumによる形質転換(Nicotiana) Agrobacteriumによる形質転換(Arabidopsis) GUS分析 コンピテントセル作成(Escherichia coli) - Freeze Thaw コンピテントセル作成(Escherichia coli) - Electroporation コンピテントセル作成(Escherichia coli) - Freeze Thaw(いんちき) 遺伝子発現など DIG
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